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LyraFect™Cell Counting Kit-8 (CCK-8)

产品详情  

目录号：CY-2-0012   

保存方法 ：4℃避光，12 个月  ；-20℃避光，2年 

产品简介

CCK-8试剂中含有WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐）是一种类似于MTT的化合物，它在电子耦合试剂存在条件下，可以被线粒体内的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲瓒产物Formazan，生成的Formazan数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析，细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。

产品特色

1.    CCK-8的检测灵敏度高于其他方法，如MTT，XTT或WST-1；

2.    操作更简单，无需有机溶剂；

3.    对细胞无毒性；

4.    性能稳定，即开即用；

使用方法

1）接种细胞悬液100μL 于96孔板，在细胞培养箱中（37°C, 5% CO2）孵育。

2）取出需要检测的细胞，于细胞培养液中直接加入1/10体积的Cell Counting Kit-8 (CCK-8)，充分混合，保证孔中颜色均一性，但不可有气泡产生。对96孔板，每 100µl培养液加入10µl检测试剂。

3）继续于细胞培养箱中培养1-4小时。

4）酶标仪读数之前，置于孔板于摇床振荡上约1min，确保孔板颜色均匀。

5）用酶标仪读取450nm光吸收值，计算细胞活性。

细胞存活率=[(实验组-空白组) / (对照组-空白组)] × 100%

细胞抑制率=[(对照组-实验组) / (对照组-空白组)] × 100%

实验组：含细胞、培养基、CCK-8和药物；

对照组：含细胞、培养基、CCK-8，不含药物；

空白组：含培养基、CCK-8，不含细胞、药物。

6）可选步骤：在100μl细胞中加入10 μl 3 % SDS 以终止反应，可在3天内读取数据。

应用领域

1）细胞增殖测定

2）细胞活力检测

3）细胞因子实验

4）细胞毒性实验

注意事项

1. 使用前请充分混匀，避免反复冻融；

2. 96孔板注意边缘效应，建议弃用周围一圈板孔，改加相同量的PBS。

3. 本产品只能用于研究，严禁用于人体。

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

免责声明: 本公司将不为任何不正常使用此产品时所发生的意外负责。

常见问题

问：请问下你们公司的CCK8试剂， 对于一般肿瘤细胞来说加后建议孵育多久。吸光值在多少左右正常？

答：一般是1-4 h，具体时间的话需要根据您的细胞情况和预实验结果来确定。一般吸光值在0.8-1.2左右测定会比较好。

问：请问 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)外周一圈需要铺满细胞吗？

答：不建议铺满外周的细胞，外周建议加 PBS 防止内层挥发。

问：Cell Counting Kit-8 (CCK-8)水浴加热后，吸光度很低，是不是不能水浴加热？

答：加完CCK8之后只需要放置在37度恒温培养箱中就可以了，不用水浴加热。吸光度低可能是活细胞数量较少，或者孵育时间较短。

问：请问 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)实验中96孔板的每孔推荐细胞数是多少？

答：确保细胞处于良好的生长状态，通常细胞密度达到约70%的汇合度时进行实验最为适宜。过密或过疏的细胞分布可能会影响检测结果的准确性。确保每孔的体积相同，以维持一致的反应条件，加入CCK-8后，立即将平板放回预设条件的细胞培养箱中，继续培养1-4小时。

问：请问你们加CCK8之前会洗孔板吗？

答：一般不用换液，每100 mL细胞培养液加10 μL CCK8即可。但如果药物具有还原性，会和 CCK-8 发生显色反应，增加吸光度，就需要在加 CCK-8 之前更换培养基，去掉药物的影响。

问：请问CCK8能放-80℃吗？

答：可以，注意避免反复冻融。

问：请问 Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 加多少到细胞培养液里？

答：细胞培养液中直接加入 1/10 体积的 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)，充分混合，保证孔中颜色均一性，但不可有气泡产生。96 孔板，每 100 μL 培养液加入 10 μL 检测试剂。

问：请问 Cell Counting Kit-8 (CCK-8)需要避光吗？

答：需要避光，处理和储存CCK-8时，应当采取适当的避光措施，以确保实验数据的准确性和一致性。